Citokīnu pārmaiņu izpēte asins serumā plaušu vēža pacientiem

Projekta vadītāja U. Kopeika

Ievads.

Plaušu vēzis ir viena no biežākajām onkoloģiskajām slimības, kas raksturojas ar ļoti lielu mirstību. Gadā Latvijā novērojami apmēram 1200 jauni slimības gadījumi. Lai izvēlētos efektīvāko ārstēšanas metodi, ir jābūt precīzi zināmai audzēja formai un stadijai, to precizēšanai patreiz ir jāveic invazīvas manipulācijas, kas ir dārgas un mēdz radīt dažādas komplikācijas. Nepietiekoši konkretizējot stadiju pirms operācijas, operācijas laikā var izrādīties, ka tā nav iespējama, vai arī pēcoperācijas rezultāts var būt neapmierinošs. Nosakot citokīnu līmeni pacientu asins serumā, varētu spriest par audzēja dabu un izplatību- mazinvazīvi un precīzi, bet pēc ārstēšanas- laicīgi konstatēt audzēja recidīvu. Jārēķinās, ka, pieaugot apkārtējās vides piesārņojumam, plaušu vēža sastopamība gadu no gada palielinās. Nerisinot šo problēmu, aizvien vairāk cilvēku ies bojā novēlotas vai neprecīzas plaušu vēža diagnostikas dēļ.

Darba mērķis.

Plānojam noteikt citokīnu līmeni asins serumā plaušu vēža slimniekiem pirms operācijas, kā arī pēc operācijas pēc dažādiem laika intervāliem. Citokīnu noteikšanai izmantosim ELISA metodi. Salīdzināsim citokīnu līmeni ar plaušu vēža stadiju un ārstēšanas rezultātu. Konstatējot noteiktu citokīnu saistību ar plaušu audzējiem, varētu radīt jaunas diagnostikas un ārstēšanas metodes. Interleikīna -2 analogs jau tiek izmantots nieru vēža un melanomas ārstēšanā.
Turklāt mūsu izvēli noteica arī: EKMI rīcībā esošā pētnieciskās iekārtas, iespējas rekrutēt pacientus- Latvijā plaušu vēža operācijas veic tikai 2 slimnīcās, kā arī projekta darba grupas pieredze un specializācija šajā jomā.

Virsmērķis: Izmantojot mūsdienu tehnoloģiskās iespējas, izstrādāt un ieviest jaunas pieejas plaušu vēža stadijas un gaitas diagnostikā.

Projekta konkrētais mērķis: Pacientiem plaušu vēzi izstrādāt un ieviest indicētu augšanas faktoru – citokīnu diagnostisko paneli (profilu), atrast atsevišķu citokīnu saistību ar slimības smagumu vai prognozi.

Sasniedzamie (izmērāmie) rezultāti:

• Izstrādātas un ieviestas jaunas medicīniskas tehnoloģijas – 1 gab. (t.i. pieteiktas projekta atskaites posmā); 
• Publicēti un prezentēti zinātniskie dati – 3 publikācijas, 6 prezentācijas (t.i. pieteiktas projekta atskaites posmā); 
• Tiek izstrādāts promocijas darbs saistībā ar pētījuma tematiku – 1 gab.

Iegūstamā produkta / pakalpojuma īss apraksts:

Medicīniska tehnoloģija: Pacientiem ar plaušu vēzi tiks izstrādāts indicēts multi-citokīnu, tai skaitā endotelīna augšanas, fibroblastu augšanas, pretaudzēju imunitāti raksturojošo u.c. faktoru (klīniski diagnostisks imūnfluoriscences multi-tests) multipleksai noteikšanai asins serumā, lai izdarītu secinājumus par audzēja stadiju, organisma pretaudzēju imunitāti un slimības prognozi.

Projekta izvēlētā alternatīva un veicamie uzdevumi:

Pētījumā noteiksim citokīnu saistību ar plaušu vēža esamību vai neesamību un tā izplatību organismā, no tā izriet darba uzdevumi: 

1. Pacienti, kuri ārstēsies plaušu ķirurģijas centrā tiks sadalīti 3 grupās. Kontrolgrupā tiks iekļauti pacienti ar neonkoloģiskām plaušu slimībām, pārējās divas grupas- pacienti ar plaušu vēži, kas tiks vai netiks operēti, sekojot patreizējām plaušu ķirurģijas nostādnēm. 
2. Visu šo trīs grupu pacientiem veikt standarta pārbaudes, kā pirms plaušu operācijām, bet papildus noteiksim citokīnus, t (IL1ß, IL-1ra, IL-2, IL4, IL6, IL8, IL10, IFG, TNFα, utt. precīzs citokīnu profils atkarīgs no piešķirtā finansējuma ) noteikšanu izmantojot LUMINEX®-200 sistēmu un LINCOplex imūnfluoriscences komplektus (kitus) (Linco Research Inc., ASV) plaša spektra citokīnu un multipleksai noteikšanai asins serumos — ar mērķi izstrādāt marķieru paneli (profilu), kas efektīvi raksturotu par audzēja stadiju, organisma pretaudzēju imunitāti un slimības prognozi. Salīdzināt klasisko izmeklējumu un citokīnu koncentrācijas saistību. 
3. Sekot slimības gaitai un citokīnu koncentrācijas pārmaiņām, sevišķu interesi rada operēto pacientu grupa, jo pēc radikālas audzēja operācijas citokīnu koncentrācijai vajadzētu kļūt normālai. Un agrīni palielināties audzēja recidīva gadījumos. 
4. Salīdzināt seruma citokīnu koncentrāciju ar imunohistoķīmiski nosakāmu pretaudzēja aktivitāti ( tumora infiltrācija ar T killeriem). 
5. Salīdzināt citokīnu koncentrāciju un tādus klasiskus audzēju izplatības marķierus kā CEA, CYFRA. 
6. Izstrādāt diagnostisku citokīnu paneli plaušu vēža gaitas un prognozes diagnostikai.

Izvēlētā projekta dotā risinājuma pamatojums:

No ekonomiskā viedokļa

Jaunā imunfluoriscences citokīnu un hormonu multipleksā noteikšanas tehnoloģija mūsdienās strauji izplatās (tirgū palielinās šāda tipa analizatoru un kitu piedāvājums, šajā projektā izmantots LUMINEX®200, Linco Research Inc) un gūst popularitāti, jo nav jāiepērk un jāveic daudzu atsevišķu citokīnu testi, bet tos var veikt vienlaikus; turklāt pasūtītājs pats var nokomplektēt nepieciešamo marķieru (citokīnu) klāstu pēc vajadzības, iekļaujot vajadzīgos un atsakoties no neizmantotajiem, kas ļauj vienu un to pašu iekārtu sekmīgi izmantot vairākos dažādos projektos. Tas ir labs ekonomisks risinājums. Jāatzīmē, ka aprobējot klīniski pamatotus citokīnu profilus – paneļus, palielināsies to izmantošana ārstniecības praksē, kā rezultātā samazināsies izmaksas.

No stratēģiskās nozīmības viedokļa

Projektā izmantotās diagnostiskās pieejas ir principiāli nozīmīgas: Jaunā aspektā padziļināti paredz molekulārbioloģiskos izmeklējumus, respektīvi, vienlaicīgu – paneļveidīgu citokīnu, t.sk. angioģenēzes un pretaudzēju aktivitātes multipleksu noteikšanu, kuru profila izvēle balstīta uz jaunākajiem zinātniskajiem datiem. Pētījuma gaitā paredzēts paneli pielāgot, lai veiktu tikai informatīvāko citokīnu analīzi, atmetot neinformatīvos.
Tādejādi veselības traucējumu novērtēšana tiek realizēta paralēli ar molekulārbioloģisku un funkcionāli diagnostiku pieeju, turklāt ar līdz šim klīniski netradicionālām, jaunām metodēm tiek iegūta informāciju par patofizioloģisko stāvokli un klīnisko perspektīvu.

Projekta ilgums pašreiz 2007.-2008. gads, plānots pagarināt un pabeigt 2009.g. 31. decembrī.

Pašreiz paveiktais.

Pētījumā ir jau iesaistīti apmēram 100 pacienti. Kontrolgrupai ir noteikts citokīnu līmenis asins serumā, plaušu vēža pacientu grupai tas ir noteikts pirms operācijas un vairākas reizes pēc operācijas. Pašreiz noteik šo pacientu novērošana dinamikā, lai konstatētu, kā citokīnu līmeņa pārmaiņas korelē ar pacientu dzīvildzi. Pašreiz sava darba rezultātus projekta pētnieku grupa ir prezentējusi vairākās starptautiskās konferencēs, kā arī iesniegtas publikācijas starptautiski citējamos žurnālos.

Saistība ar citiem projektiem:

Zināma zinātniski saturiska saistība ir ar citiem LU EKMI projektiem- citokīnu noteikšana cukura diabēta slimniekiem vai citokīnu noteikšana plaušu slimnieku izelpas gaisā, kuros tiek izmantots nesen iegādātais LUMINEX®200, Linco Research Inc. Projektus vieno šīs iekārtas izmantošana, taču katrā pētījumā tiek izmantoti dažādi citokīnu un citu biomarķieru paneļi (kiti), kā rezultātā tiek panākta dārgas aparatūras sekmīga un intensīva izmantošana vairākos projektos.

Kādi riski apdraud projekta realizāciju?

Plānotā finansējuma ietvaros projekta realizācijas riski ir minimāli, piemēram, varbūt nelielas izmaiņas attiecībā uz plānoto rekrutēto pacientu skaitu pētījumā vai attiecībā uz atsevišķiem pacientiem veikto izmeklējumu kopumu (jo pacientam ir tiesības jebkurā brīdī izstāties no pētījuma vai arī ir kādi citi iemesli kāpēc pacients ir pārtraucis savu dalību pētījumā).